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电视动画《二十面相少女》改编自日本漫画家小原慎司原作的同名漫画。在漫画杂志《月刊ComicFlapper》2008年2月号上，发表了TV动画化的决定。动画化的是其外传作品《二十面相的女儿现世之夜》，讲的是美津子11岁到13岁之间的心灵的成长。

美津子：（CV:平野绫）

美甘千津子，简称千子。生于大资本家美甘家，由于父母双亡而由叔父叔母养育。但叔母一直算计着让美津子死去而得到她的遗产，让美津子不停地摄入放了毒药的食物。拯救了在家庭内被孤立心里痛苦的美津子的，是世间知名的怪人二十面相。十一岁的美津子与二十面相一起游向自由与冒险的大海。被二十面相当做继承人来培养，被称为‘二十面相的女儿’自己也是这么认为的二十面相（千子叫“叔叔”，健叫boss)：是一位被称为：“只要人们一见面，就一定会以他为话题”的超有名的怪盗。但是谁都不知道他真正的长相及名字。他只对真正美丽的东西感兴趣，于是被美津子美丽的心灵所吸引的二十面相，从满心计算并欺骗美津子的叔叔婶婶那里将她抢夺了过去。其实他还另有意图，似乎还有些自己的什么目的……是大战中大型破坏性武器的研究员，一个天才。后认识到战争的残酷性，计划销毁一切研究数据。故事即围绕这展开。个人魅力十分强大啊！！！健

又名肯,二十面相的伙伴，十五岁的少年。一直很崇拜二十面相。对于新加入的美津子，他就像是个哥哥一样。在美津子来之前，他是二十面相的伙伴中年纪最小的，担任着活跃气氛的角色。得意武器是小刀。长大后走上与千子不同的道路，但彼此还是朋友，并在黑暗中守护着千子···（健本身就很不坦率的啊！！！看得出他是喜欢千子的说···）虎

二十面相众多对其盗窃品窥视者之一，亦是通缉犯。把健的眼睛抓伤（健最终独眼），策划了袭击船长一行人的行动，致使大伙仅剩健与千子幸存，更使千子与二十面相失去联系、又回到了曾经那个恶毒的女人身边。虎在完成这一切后死于受伤与火车爆炸。（更多人物详见《二十面相少女》动画）船长

在二十面相的伙伴中，他的存在可以说是相当有份量的一个人物。嘴很坏，但对于健和美津子这样的小孩子却很温柔地照顾他们。后来在大伙遭受虎的恶性侵袭时身受数抢，选择抱着敌人跳下火车（为敬爱的船长默哀）留(CV：新井里美）)

千津子阿姨家的女佣,于第七集出现,在千津子与二十面相失去联系期间照顾千津子.（画风类似BLOOD+的主角音无小夜）

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