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引物与模板非特异性配对位点的碱基配对率小于70%

引物设计不求人,90 的科研人得心应手的小诀窍

大家好,感谢邀请,今天来为大家分享一下引物与模板非特异性配对位点的碱基配对率小于70%的问题,以及和模板最佳配对的一些困惑,大家要是还不太明白的话,也没有关系,因为接下来将为大家分享,希望可以帮助到大家,解决大家的问题,下面就开始吧!

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引物与模板配对时,预期应当只与目的基因上你所设计的位点配对,这样的成为特异性配对

微生物群落多样性研究 16S引物选择指南

但是引物也有可能与模板的其他位置配对结合,这样的结合就成为非特异性配对,引物所结合的位点就称非特异性结合位点

其原因可能是引物本身序列的特异性不强,与模板上其他的序列有若干可互补的碱基序列

或者是设计的退火温度不好,导致引物的特异性结合能力差

希望对你有帮助,望采纳

引物的tm值计算要不要包括不与模板配对的碱基啊

我觉得不用吧计算Tm和退火不是算的双链部分的嘛

不用计算附加碱基,如果要调整PCR的特异性,只是提高退火温度就好了,这个提高不是以附加碱基为基础的.克隆实验倒是无所谓,如果你是要在附加碱基中加入一个小Tag等比较长的片段,计算了附加碱基,就有可能扩增不出来.

下面的链接有详细的讨论,楼主可以去参考下

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